根據(jù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性,造成神經(jīng)傳導介質(zhì)乙酰膽堿的積累,影響正常傳導,使昆蟲中毒死亡這一昆蟲毒理學原理,用在對農(nóng)藥殘留的檢測中。如果蔬菜的提取液中不含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥或殘留量較低,酶的活性不被抑制,試驗中加入的底物就被酶水解,水解產(chǎn)物與加入的顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色。反之,如果蔬菜的提取液中含有一定量的有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥酶的活性就被抑制或部分被抑制,試驗中加入的底物就不能被酶水解或少部分被水解,從而不顯色或顏色變化很小,用分光光度計測定吸光值隨時間的變化情況計算出抑制率,就可以判斷蔬菜中含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。
二、 交直兩用、可實現(xiàn)流動測試。儀器自備微型自動充電電路和充電電池組,停電也不影響測試工作的進行,如工作需要還可到室外現(xiàn)場測試。
三、測試速度快、測試成本低。本儀器采用獨特的旋轉(zhuǎn)比色盒結(jié)構(gòu)設(shè)計,對照樣品同時對四個被測樣品進行測試,藥劑成本低。
用電源線將儀器與電源插座接通,充電指示燈點亮,儀器內(nèi)部的充電電池組開始進行充電,此時不影響儀器使用,8小時后,電池充滿。注意:新儀器頭三次充電要將電池電量放盡(所謂放盡是指切斷電源線,按下電源開關(guān),當儀器不再顯示數(shù)字時即為電量放盡),這樣可以使充電電池組性能達到最佳狀態(tài)。
被測樣本的抽取:
隨機抽取果菜容器各部位的蔬菜,每種樣本至少取0.5—1.0公斤左右,并盡量具有代表性。
一、樣品的制備及前處理:
1、用剪刀或刀片取來自不同植株葉片(至少8—10片葉子)的樣本;水果及果菜從表皮至果肉1—1.5CM處取樣,待用。
2、將酶液、顯色劑、底物溶劑從冰箱冷凍室中取出,在室溫條件下融化;將緩沖劑從冰箱冷藏室中取出,將上述試劑在室溫下自然升溫至室溫,待用。
3、天平稱取2g切碎的樣本(非葉菜類取4g),放入一只100ml燒杯中,用量桶量取20ml緩沖溶劑倒入其中,振蕩1—2分鐘,倒出提取液,靜置3—5分鐘。取兩只塑料試管,分別標上“對照”、 “1”,用微量取樣器分別加入50ul酶溶劑;在“對照”試管中用移液管加入3ml緩沖溶劑,1號試管中用移液管加入3ml提取液,再用微量取樣器向兩支試管中分別加入50ul顯色溶劑(此時“對照”試管中的液體稱為對照樣本,1號試管中的液體稱為被測樣本。如有多個被測樣本,可同時進行,先取4只塑料試管,分別標上“2”、 “3”、 “4”、 “5”,然后向每個試管中分別加入3ml提取液,再各加入50ul酶液和顯色溶劑);于37℃恒溫箱或恒溫水浴鍋中放置20-30分鐘(如無恒溫箱和恒溫水浴鍋,可在室溫下進行,但溫度應(yīng)保持在25—40℃)。
二、儀器的預(yù)熱及調(diào)試:
取出儀器,接通電源,打開電源開關(guān),顯示屏顯示“TFC”,3秒鐘后自動顯示“T”,儀器進入預(yù)熱狀態(tài)(10分鐘后才可進行測試)。打開圓蓋,取出旋轉(zhuǎn)比色槽中的比色皿;將圓蓋上的標識與旋轉(zhuǎn)比色槽上的標識一一對應(yīng),蓋上圓蓋,順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,使圓蓋上的“對照”對準儀器上的光孔標志。按一下功能鍵,顯示一數(shù)字,此數(shù)字無意義,儀器調(diào)試完畢,準備進行測試工作。
按一下功能鍵,顯示“A”,取下圓蓋,將經(jīng)過30分鐘恒溫培養(yǎng)的對照樣本及被測樣本從恒溫箱或恒溫水浴中取出,用微量取樣器向?qū)φ諛颖局屑尤?0ul底物溶劑,蓋上蓋立刻劇烈搖一下后,取出標有“對照”的比色皿,將對照樣本倒入其中,將比色皿放入標有“對照”的比色槽中,蓋上圓蓋,按一下功能鍵,顯示數(shù)字后1秒鐘時立刻按一下功能鍵,顯示“----”, 同時順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,使“1”對準光孔標志,3秒鐘后自動顯示“A1”,,取下圓蓋,向第一個被測樣本中用微量取樣器加入50ul底物,蓋上蓋劇烈搖一下后立刻倒入1號比色皿中,放入1號比色槽中,蓋上圓蓋,再按一下功能鍵,當顯示數(shù)字后一秒鐘時立刻按一下功能鍵,顯示“----”, 同時順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,將2對準光孔標志,3秒鐘后自動顯示“A2”,取下圓蓋;向第2個被測樣本中加入50ul底物,蓋上蓋劇烈搖一下后立刻倒入2號比色皿中,將其放入2號比色槽中,蓋上圓蓋,按一下功能鍵,顯示數(shù)字后1秒鐘時按一下功能鍵,顯示“----”, 同時順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,3秒鐘后,自動顯示“A3”,,將“3”對準光孔標志,取下圓蓋;向第3個被測樣本中加入50ul底物,蓋上蓋劇烈搖一下,立刻倒入3號比色皿中,放入3號比色槽中,蓋上圓蓋,按一下功能鍵,當顯示數(shù)字后1秒鐘時,立刻按一下功能鍵,顯示“----”, 同時順時針轉(zhuǎn)動圓盤,3秒鐘后顯示“A4”,使4對準光孔標志,取下圓蓋;向第4個被測樣本中加入50ul底物,蓋上蓋劇烈搖一下,立刻倒入4號比色皿中,將其放入4號比色槽中,蓋上圓蓋,按一下功能鍵,顯示數(shù)字后1秒鐘時立刻按一下功能鍵,顯示“----”, 同時順時針轉(zhuǎn)動圓盤, 使5對準光孔標志,3秒鐘后顯示“A5”, 取下圓蓋;向第5個被測樣本中加入50ul底物, 蓋上蓋劇烈搖一下, 立刻倒入5號比色皿中,將其放入5號比色槽中,蓋上圓蓋,按一下功能,顯示數(shù)字后1秒鐘時立刻按一下功能鍵,3秒鐘后儀器顯示倒計時間,單位是“秒”。順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,將“對照”對準光孔標志,這時,請不要動儀器的任何按鍵,儀器進入程序自控狀態(tài)。當?shù)褂嫊r結(jié)束時,儀器顯示“A′”,按一下功能鍵,顯示不斷變化的數(shù)字,當顯示“A1′”時,順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,將1對準光孔標志,按一下功能鍵,顯示不斷變化的數(shù)字,當顯示“A2′”時,順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,將2對準光孔標志,按一下功能鍵,顯示不斷變化的數(shù)字,當顯示“A3′”時,順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,將3對準光孔標志,按一下功能鍵,顯示不斷變化的數(shù)字,當顯示“A4′”時,順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,將4對準光孔標志,按一下功能鍵,顯示不斷變化的數(shù)字,當顯示“A5′”時順時針轉(zhuǎn)動圓蓋,將5對準光孔標志,按一下功能鍵,顯示不斷變化的數(shù)字,當儀器顯示“----”時,按一下功能鍵,顯示“E1”,1秒鐘后自動顯示的數(shù)字即為第一個被測樣本的測試結(jié)果,再按一下功能鍵,顯示“E2”,1秒鐘后自動顯示的數(shù)字即為第2個被測樣本的被測結(jié)果,再按一下功能鍵,顯示“E3”,1秒鐘后自動顯示的數(shù)字即為第3個被測樣本的測試結(jié)果,再按一下功能鍵,顯示“E4”,1秒鐘后自動顯示的數(shù)字即為第4個被測樣本的測試結(jié)果。再按一下功能鍵,顯示“E5”,1 秒鐘后自動顯示的數(shù)字即為第5個被測樣本的測試結(jié)果,再按一下功能鍵,顯示“P ?”,如需將測試結(jié)果打印出來,按一下調(diào)整鍵,打印機即可將測試結(jié)果打印出來。打印完畢后儀器顯示“T”,轉(zhuǎn)動圓蓋,將1對準小三角,進入下一次測試的預(yù)備狀態(tài)。
以上測試過程要盡快完成,盡量縮短時間,這樣才可使測試的結(jié)果更加精確,切記!!
測試結(jié)果計算:
△Ac — △As
抑制率(%)= ────────── * 100
△Ac
△Ac:對照樣本3分鐘后與3分鐘前吸光值之差
△As:被測樣本3 分鐘后與3分鐘前吸光值之差
以上計算過程由儀器本身完成,不用人為計算。
測試結(jié)果以酶的抑制率(百分數(shù))來表示。
測樣本的抑制率70%時,說明蔬菜中可能含有某種有機磷類或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留。抑制率≥70%的樣本要反復檢測2次以上,幾次重復檢測的重現(xiàn)性應(yīng)在80%以上,方可做出肯定結(jié)論。
結(jié)果處理程序:
被測樣本經(jīng)檢測后,如抑制率超標,則需重復檢測兩次以上,如仍不合格,就用氣相色譜法進一步定性定量分析(GB/T17331-1998)。
1、打。喝缧鑼y試結(jié)果打印出來,只需按一下打印鍵即可。
2、打印紙的更換:如打印紙用完需要更換新的打印紙時,先要將儀器主機電源開,打印機指示燈點亮,用手指摳住打印機面板兩邊的凹槽,向上提即可將其打開,換上新紙卷后,將紙的一端插進進紙槽中,按下“SEL”鍵,打印機指示燈熄滅,按下“LF”鍵,打印機即開始輸紙,等到打印紙露出1厘米左右時,按下“SEL”鍵,打印機停止供紙,打印紙更換完畢。然后將面板復位。
3、色帶的更換:將打印機面板兩邊的凹槽,向上提起,將色帶取出,換上新色帶即可。然后將面板復位。
如果還有不清楚的情況可請問專業(yè)人員!