層析分離技術(shù)是我國高?！渡治鰧?shí)驗(yàn)》中的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)。70年代后期國內(nèi)研制的“核酸蛋白檢測儀”，使用某一波長(280nm或254nm等)進(jìn)行定性檢測分離，用記錄儀描譜，長期在高校實(shí)驗(yàn)室使用。在我國科技人員努力下，近年來，市場上相繼出現(xiàn)了可代替記錄儀的“電腦采集器”、“電腦核酸蛋白檢測儀”、“雙波長電腦核酸蛋白檢測儀”、“層析-電導(dǎo)聯(lián)用系統(tǒng)”等產(chǎn)品，迅速應(yīng)用到教學(xué)實(shí)驗(yàn)、科學(xué)研究和藥物生產(chǎn)領(lǐng)域。

　　一、檢測原理

　　所有紫外吸收檢測器工作原理都是基于光的吸收定律---朗伯-比耳定律。該定律指出，當(dāng)一束單色光(λ)輻射通過稀濃度物質(zhì)溶液時(shí)，如果溶劑不吸收光，則液體的吸光度與吸光物質(zhì)的濃度和光經(jīng)過溶液的距離成正比。其關(guān)系式為：

　　A(λ)=a(λ)bc

　　A=-LgT=Lg1/T

　　二、層析裝置分類：

　　按描譜方式分有：記錄儀描譜和電腦描譜(外加采集分析器)

　　按檢測波長分有：單波長檢測和雙波長(多波長)同步檢測

　　按檢驗(yàn)器分有：核酸蛋白檢測和核酸蛋白檢測、電導(dǎo)檢測聯(lián)用

　　三.傳統(tǒng)檢測儀：

　　傳統(tǒng)層析實(shí)驗(yàn)裝置由單波長核酸蛋白檢測儀(外加電腦采集器或?qū)㈦娔X采集器裝入檢測儀中也屬此類)、層析柱、恒流泵、部分收集器和記錄儀等部件構(gòu)成。用一種波長(如280nm或254nm等)下對已知物質(zhì)(蛋白或核酸等)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測，高校實(shí)驗(yàn)室的層析實(shí)驗(yàn)裝置大多屬于此類。特點(diǎn)如下：

　　1、檢測前必須選定一種波長(280nm、254nm)進(jìn)行檢測，利用物質(zhì)特征波長分離已知組分。

　　2、要求學(xué)生在檢測前一定要先調(diào)整透過率為100%，然后再調(diào)整吸光度為0。學(xué)生經(jīng)常會問：雖然透過率和吸光度在此點(diǎn)(T=100%，A=0)符合了A=lg(1/T)關(guān)系，但怎樣保證在測量范圍內(nèi)都符合朗伯--比爾定律?

　　3、傳統(tǒng)檢測儀為保證測量讀數(shù)落在儀器有效測量范圍內(nèi)，在儀器面板上都設(shè)有靈敏度選擇裝置(2.0A、1.0A、0.5A、0.2A、0.1A、0.05A等)。因此，測量前要選擇合適的靈敏度;②真正吸光度值是儀器顯示數(shù)與靈敏度的乘積;③測量中不要改變靈敏度，否則可能會帶來基線變化。

　　4、傳統(tǒng)檢測儀在不同靈敏下的測量結(jié)果均為0-10mv直流信號，將此信號輸出到記錄儀或電腦采集器。顯然，記錄紙或電腦屏上的吸光度也并非樣品實(shí)際的吸光度，也應(yīng)受到儀器靈敏度的調(diào)制。

　　四、新型檢測儀

　　以對蛋白、核酸、肽等生物大分子物質(zhì)的檢測、分離和純化為目的，新型層析實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的電腦核酸蛋白檢測系統(tǒng)具有以下特點(diǎn)：

　　1、系統(tǒng)智能調(diào)整吸光度到0.000，透光率到100%。，并在測量范圍內(nèi)的吸光度和透過率嚴(yán)格符合A=Lg(1/T)。

　　2、單波長檢測或雙波長同步檢測。

　　3、系統(tǒng)自帶數(shù)據(jù)采集工作站，檢測、采集、軟件工作站一體化系統(tǒng)集成。分析軟件具有實(shí)時(shí)描譜、分析參數(shù)、圖譜保存、圖譜打印、圖譜編輯等功能，提供峰高、峰寬、峰面積、歸一化、保留時(shí)間、半峰寬、峰底寬、面積含量、純度、層析柱分辯率等參數(shù)。